Description: 

Le BE2 se compose d’une unité de paillasse sur laquelle sont montées deux colonnes de chromatographie en verre borosilicaté de 250 mm de long et 10 mm de diamètre. Les deux sont équipés d’embouts réglables pour permettre d’étudier différentes hauteurs de lit. Au sommet de chaque colonne se trouvent des injecteurs à septum pour permettre l’introduction d’un échantillon sur la surface de la colonne. Les colonnes sont alimentées par une pompe péristaltique à trois canaux de conception à huit rouleaux afin de donner un débit régulier. La pompe a un entraînement à vitesse variable et une large gamme d’alésages de tube peut être utilisée, donnant ainsi une très large plage de débit.

Les vannes de commutation permettent à l’opérateur de sélectionner facilement la colonne souhaitée pour l’opération. Un piège à bulles est installé avant l’entrée des colonnes pour empêcher l’air d’entrer. La sortie de la colonne passe à une cuve à circulation optique UV pour la mesure de l’élution de l’échantillon. Le liquide sortant de la cellule à écoulement peut être conduit à s’écouler ou collecté à l’aide du collecteur de fractions, il est contrôlé par minuterie et a une capacité de 48 tubes à essai de 3 ml.

Il est essentiel que tous les tampons et échantillons introduits dans la colonne soient filtrés et dégazés afin de protéger la colonne. L’équipement requis à cet effet est un équipement de laboratoire standard, disponible en option (BE2-1) si nécessaire.

BE2-1 se compose d’un support de filtre à membrane, d’un ballon à vide, d’une pompe à vide à eau et de filtres à membrane. Le système de filtration des échantillons se compose d’une seringue et de filtres à membrane jetables. Des seringues et aiguilles d’injection d’échantillons sont également incluses.

Les méthodes requises pour la chromatographie liquide nécessitent une certaine pratique afin d’obtenir des résultats reproductibles. Par conséquent, pour les utilisateurs n’ayant aucune expérience dans ce domaine, il est recommandé de fournir une formation.

L’unité de chromatographie BE2 démontre un type de chromatographie industriel important, la chromatographie liquide à basse pression. Plusieurs variétés peuvent être mises en évidence par le BE2, y compris l’échange d’ions, l’exclusion de taille, l’interaction hydrophobe et la chromatographie d’affinité. Chacun de ces types utilise une méthode différente de séparation, qui sont respectivement la charge des particules, la taille et la forme des particules, l’hydrophobicité des molécules et la spécificité biologique.

Le système BE2 comprend des procédures expérimentales détaillées pour la chromatographie d’exclusion de taille, en particulier en ce qui concerne la séparation des protéines et des colorants. Cependant, il peut également être utilisé pour étudier d’autres types de chromatographie liquide à basse pression.

La chromatographie d’exclusion de taille utilise des billes poreuses pour séparer les particules de différentes tailles. La gamme de taille des pores dans les billes définit si les particules sont totalement exclues, partiellement exclues ou si elles ont une entrée complète dans toutes les billes. Les particules totalement exclues ont le temps de séjour le plus court dans la colonne, tandis que les particules qui ont une entrée complète dans les billes ont le temps de séjour le plus long. Les particules partiellement exclues ont des temps de séjour entre les deux. Sur cette base, des particules de différentes tailles sont séparées.

Capacités expérimental:

• Comprendre les principes et les pratiques de la chromatographie liquide, notamment:
  • – Emballage de colonne
  • – Exemple d’application
  • – Développement de colonnes
  • – Analyse et collecte de fractions
• Comprendre les facteurs affectant les performances de séparation
• Comprendre la mesure de la concentration de protéines grâce aux tests UV
• Des exercices d’enseignement détaillés sont inclus pour démontrer aux étudiants les aspects importants de la chromatographie d’exclusion de taille (filtration sur gel). Les informations fournies comprennent des détails sur les matrices de gel, les tampons, les protéines, etc. appropriés et les protocoles expérimentaux approfondis
• Bien que les expériences portent uniquement sur la méthode d’exclusion de taille, le système convient pour une utilisation avec d’autres systèmes de chromatographie liquide à basse pression tels que l’échange d’ions, l’affinité et l’interaction hydrophobe.
• Le système comprend une cuve à circulation UV pour mesurer la concentration en protéines. La détection du niveau est de 0,1 mg / ml de protéine (albumine sérique bovine)
• Comprendre les protocoles de fonctionnement des systèmes de chromatographie liquide basse pression
• Démonstration visuelle de la chromatographie d’exclusion de taille à l’aide de colorants
• Détermination de l’effet du débit et de la longueur de la colonne sur la séparation et la concentration du produit